尊龙凯时人生就博提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指导书，旨在为研究人员提供详细的细胞培养流程和注意事项，以确保细胞培养的成功率和实验结果的可靠性。

一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞 生长特性： 贴壁生长 冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001） 培养体系： 1640基础培养基 + 10% FBS + 1% 双抗 传代方法： 第一次建议1:2传代

传代情况： 每两天换液 备注： 用无菌离心管收集培养基，以用于对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，最好在培养至良好状态后，使用完全培养液灌满瓶子并封口。收到细胞后，务必用75%酒精喷洒全瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以使细胞状态稳定，之后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长状况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据，未提供照片将视为收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若未超过80%汇合度，则将培养液收集至离心管，保留5ml培养基至37℃、5% CO2孵箱内培养；若汇合度超80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），置于37℃孵箱消化1-2分钟。显微镜下观察细胞消化状况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲培养瓶后加入≥5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2培养箱内继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖T25培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml 尊龙凯时人生就博无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后续转入液氮罐需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮取出细胞冻存管（需佩戴防护设备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。处理方法为：将培养液收集至离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清进行对比培养。然后沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，最后加5ml完全培养基终止消化，再离心、弃上清，加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

根据细胞培养情况，我们提供不同的售后服务：如细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损或培养液泄露，将予以重发；细胞若在48小时内出现污染，需提供真实实验结果，以便核实重发；常温发货及干冰发货的细胞复苏后如未存活，需提供照片证据才可重发。其他特殊情况请咨询尊龙凯时人生就博客服团队。